Tkáňová kultura tipy

tkáňové kultury jepropagace buněk v kapalném kultivačním médiu v laboratoři pro různé vědecké účely . Například , tkáňové kultury se používají při diagnostice genetické choroby , jako médium pro pěstování intracelulární patogeny , jako jsou bakterie nebo viry, nebo při vyšetřování samotných buněk . Tkáňová kultura Buňky

Některé buňky se drží dna Petriho misek nebo zůstávají suspendovány v kapalině . Buňky mohou být rostlinného nebo živočišného původu . Buňky používané v tkáňových kulturách mohou být primární buňky , což znamená, že byly odebrány přímo z organismu , nebo z buněčné linie, která byla udržována v kultuře . Buněčné linie jsou často rakovinné buňky , a to je třeba brát v úvahu při plánování a interpretaci experimentů .
Dopřejte buňky Jemně

Adherentní buňky jsou odstraněny z jejich Petriho misky pro průchod tím, škrábání nebo proteázy , obecně trypsinu a EDTA . Škrábání zabíjí mnoho buněk, a měly by být používány pouze při přípravě buněčných lyzátů ( kapalné přípravky s obsahem buněk pro analýzu ), nebo když je to naprosto nutné zabránit trypsin /EDTA . Celým

trypsinizaci odstraňuje nejen proteiny , které se řídí buňky do misky ale většina dalších proteinů na membráně buňky , také. Buňky míč a trvat nějakou dobu , obvykle přes noc , obnovit pouto s misky . Přidání minimální množství trypsinu - asi 1 ml na 25 cm2 baňce se - houpací Baňka se po dobu pěti sekund nebo méně pro potaženíjednovrstvé a vylévání nebo aspiraci přebytek trypsinu se sníží množství trypsinu , na které semonovrstva vystavena . Ať buňky odpočinek v inkubátoru při trypsinizací . Celým

Po buňky sklouznout na dno misky , přidá média se sérem a nasaje lyzátu nahoru a dolů v jemně pipetou . Nechte trochu média zůstat v koutu, jak jste nepipetujte nahoru a dolů několikrát rozdělit shluky a získat i zastavení.

Nevysávejte bubliny do pipety . Také není důkladně promíchat nebo vírové buněčnou suspenzi ; buňky jsou velmi křehké v tomto sbalených -up stavu .
na teplo inaktivovat nebo ne k ohřevu deaktivovat

buněčné kultury techniky byly v plenkách , fetální bovinní sérum ( FBS) bylo známo, že obsahují komplementu , které jsou proteiny imunitního systému , že lyžují buňky . Komplementu nejsou žádoucí v buněčné kultuře . Tepelná inaktivace FBS na 56 stupňů Celsia po dobu 30 minut bude činit komplementu neaktivní . Předehřívání FBS na 37 ° C je také dost inaktivaci komplementu .

V prvních dnech , tepelná inaktivace FBS také zabil Mycoplasma a jiné nečistoty . V té době , filtrační sterilizace byla provedena s 0.45um filtry . Dnes jsme filtr sterilizovat FBS a médií přes 0.1um nebo dokonce 0.04um filtrů . No mycoplasma se proklouznout , že

To nám ponechává otázku, zda je či není na teplo inaktivaci

Tepelná inaktivace degraduje všech složek FBS - . . , Jako jsou vitaminy , aminokyseliny a růstové faktory - . případně pod prahem pro některé vybíravé buněčných linií

Pokud pracujete s pomalu rostoucí nebo mlsný buněčné linie , zvážit pouze filtrovat sterilizaci své FBS . Možná zjistíte, zvyšuje odolnost vašich buněk .