TMRE Protocol

tetramethylrhodamin ethyl ( TMRE ) je" pomalý , lipofilní , kationaktivní fluorescenční barvivo reditribution " použitý v Potenciál Kit posuzování MitoPT ™ TMRE /TMRM mitochondriální membrány , vyrobené imunochemicky Technologies , LLC . Tento proces pomáhá zobrazit transmembránový elektrický gradient potenciálu v buňkách . Příprava testu

protokol je jednoduché následovat , a trvá přibližně 20 minut zpracovat při teplotě 37 stupňů Celsia . Živé buňky použité v testu může trvat několik hodin a několik dní se připravit k použití. Kontrolní buňky může trvat několik hodin na přípravu , neboť je třeba indukované podstoupit apoptózu .
Protocol část 1

kultura buněk do hustoty optimální pro apoptózu nebo oxidační stres indukce , v závislosti na konkrétní indukční protokol , ale ne vyšší než 10 ( 6 ) buněk /ml .
protokol Část 2

Současně čas , kultura,non - indukované populace buněk negativní kontroly ( ve stejné hustoty jako indukované populace .
protokol Část 3

indukovat apoptózu nebo úmyslně depolarize mitochondrie následující požadovaný protokol .
protokol Část 4

Připravte 1X Puncovní /promývacího pufru .
protokol části 5 až 8

Připravte 1 mm nebo 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM skladem . Za protokolu v části 6 , připravit 1:100 ředění 1 mm, nebo 1:20 ředění 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM řešení pro stouply do buněčných vzorků kultur .

protokolu části 7 , skvrn buňky pomocí konečné 20-200 nM koncentraci MitoPT ™ TMRE /TMRM řešení .

protokolu části 8 , analyzovat údaje .