Jak jsem se seřadí DNA pro analýzu ?

Elektroforézou v agarózovém gelu jenejčastější způsob vizuální analýzy DNA fragmentu , který umožňuje technikům vizuálně rozpoznat fragmenty DNA na základě velikosti . Agarózovém gelu udržuje magnetické pole , a , protože DNA má záporný náboj , se pohybuje směrem k pozitivnímu konci magnetického pole . Menší fragmenty DNA pohybovat rychleji pomocí gelu a větší fragmenty pohybovat pomaleji . DNA fragmenty jsou fluorescenčně obarví interkalační činidlo známé jako ethidium bromidu . To umožňuje srovnání několika elektroforéze DNA vzorků na gelu . Věci, které budete potřebovat klipart agarózovém gelu , o 0,7 procenta na 2 procenta
Tris - borátového - EDTA ( TBA ) , tris - acetát - EDTA ( TAE ) , lithium octanu sodného ( LA ) , kyselina boritá ( SB ) vyrovnávací
Etidiumbromid
gel Loading Dye
gel zásobník
elektroforéza Komory
Rukavice
ochranu očí
pipetou
elektroforéza hřeben
Zobrazit další instrukce
Příprava 0,7 procenta agarózovém gelu
1

naváží se 0,7 g agarózy prášku a pak umístěte do velkého (250 ml ) Erlenmeyerovy baňky .
2

Přidat 100 ml z 1X ( pravidelné pevnost ) pufru ( TAE , TBE , SB nebo LB pufr) do Erlenmeyerovy baňky obsahující agarózový prášek .
3

Mikrovlnná nebo tepla pomocí Bunsen hořák pro přibližně jednu minut , dokud se roztok stane čirým aagarózy nerozpustí .
4

Baňka se vyjme ze zdroje tepla a nechte ji zchladnout na 55 až 60 stupňů Celsia .
5

přidat 1 ul ( mikrolitr ) ethidiumbromidu k ochlazenému roztoku agarózy pomocí pipety odpovídající velikosti , obvykle 1 ml . Kroužením řešení pro mix .
6

pomalu nalijte gel na gelové zásobníku , zajištění nedochází k vytváření bublin v průběhu tohoto procesu . Pokud nejsou k dispozici žádné dodávané dobře přehrady s gelovou zásobníku , používejte maskovací pásky pro jejich vytvoření .
7

Umístěte elektroforézy hřeben opatrně do gelu , zajišťuje pevnou pozici a ve správné orientaci . Elektroforéza hřebeny se může značně lišit od počtu zubů , které mají . Nechtegel pro nastavení po dobu přibližně 25 minut
8

ponořte gel ve stejném pufru použitého k přípravě roztoku agaorse - . V tomto případě , a 1X pufr . Ponořte gel až v 5 ml promývacího pufru .
Příprava a Loading DNA do agarózový gel pro analýzu
klipart 9

Přenos 5 až 10 ul váš vzorek ( y) z jejich reakčních zkumavek do čerstvých zkumavek . V případě, že chcete využívat celý reakční směsi ,čerstvé trubka není nutné .
10

Přidat 0,2 x pufru do každé z vašich čerstvých zkumavek obsahujících váš vzorek DNA pro nakládku .

11

pomalu Odstraňte elektroforézy hřeben , zajistí, že nemusíte rozbít gel nebo vytvořit jakýkoli prostor mezi spodní části gelu a gel zásobníku .
12

Přidat pět 12 ul vhodného DNA markerprvní jamky vytvořené elektroforézy hřeben . Zda nebo neDNA marker je vhodné , závisí na velikosti fragmentů , které očekávají od svého vzorku .
13

Založte pět až 10 ul vašich vzorků do zbývajících jamek a přidejterovná množství stejné DNA markeru do konečné studny .
14

Umístěte elektrody do elektroforézy komory připojením vodičů do správných zásuvek do komory a nastavení elektrody 50 do 150 V.

15

Nechtegel běžet na jednu až čtyři hodiny.
analýza výsledků
16

Vyjměte gel z gelového komory a umístit buď v UV prostoru pro vizuální identifikaci , nebo místo v počítači, který je schopen pořídit fotografii gelu .
17

Změřte fixy vzdálenost migrace ve svých studní .

18

zakreslí vzdálenosti proti velikosti kapel na semilog milimetrový papír a nakreslete nejvhodnější řádek .
19

Vypočítejte vzdálenost z vašich neznámých kapel .

20

Odhad velikosti vašich neznámých kapel kreslení čáry se od ujeté vzdálenosti podle vašich neznámých kapel, které splňuje linii nejlépe hodí .
21

Nakreslete další čáru z tohoto setkávání se k ose velikosti .