Jak provést Allium cepa test

Cibule ( Allium cepa ) se používají k posouzení rizik pro životní prostředí tím, že rozvojové kořeny přijít do styku s látkami , které mají být testovány. Po dostatečném působení , kořeny jsou převzaty z , obarví a macerovány tak , že mobilní chromozómy lze vidět pod světelným mikroskopem . Toxicita je doloženo , jsou-li zjištěny chromozomální abnormality nebo abnormality buněčného dělení . Tipy Kořen se používá proto, že buňky jsou aktivně roste a dělení , dává dobrou šanci vidět chromozomy v různých fázích buněčného dělení . Věci, které budete potřebovat
cibule
nůž
vody
kádinky nebo jiné nádoby na přepravu kapalných látek a cibuli
Zkušební kapaliny
žiletka nebo skalpel
Lahvičky
Aceto - alkohol fixační
sklíčka
krycí sklíčka kyseliny chlorovodíkové

z nerezové oceli macerací tyč
Carbol fuchsinu skvrny
Aceto - orcein skvrnu
kyselina octová
kanadského balzámu
Světelný mikroskop
přílohu kamera pro mikroskop
Zobrazit více instrukce
Nastavení test
1

Odstraňte vnější suchou pleť 12 cibulí . Skřípání dno cibule kolem spodní desky bez poškození plocha, ze které se kořeny se objeví .
2

Vyberte kádinky , které mají ústa dostatečně široká, aby se držet spodní část cibule ponoří do zkušební kapaliny . Vyplňte kádinky s destilovanou vodou a umístit cibuli v kádinky do kontaktu s vodou . Štít po stranách kádinky s hliníkovou fólií simulovat podzemní temnotu . Měnit vodu každý den .
3

Zkontrolujte cibule základny po dvou dnech . Kořeny by vytvořily . Vyhodnotit růst kořenů a zlikvidujte dva cibuli s nejslabší růst kořenů .
4

Nastavit druhou sérii pěti pohárů každý obsahující vzorek materiálu, který se má zkoušet , například do odpadních vod nebo průmyslové odtoku . Dejte pět cibuli do těchto kádinek . Ponechat jiných pět destilované vody jako zkušební kontrol . Nechte kořeny rostou na dalších 24 hodin .
Příprava ke kořenům
5

Se skalpelem nebo žiletkou , sklizeň pět až šest kořenových špiček z každé cibule , nahrávání které byly kontroly a které byly testované osoby . Uchovávejte kořeny z jednotlivých cibulí oddělit v malých označených lahviček .
6

Fix kořenové špičky okamžitě v aceto - alkoholu v poměru 1:3 . Umístěte základních tipů pro cibuli na mikroskopické sklíčko a máčet je v 1N kyselinou chlorovodíkovou , která jestejná jako 1M kyseliny chlorovodíkové , při teplotě 60 stupňů Celsia po dobu tří minut . Skvrn macerovanými hroty s karbol fuchsinu skvrna , směsi fenolu a základního fuchsinu , která se váže na prvky v buněčných stěnách , aby se staly více viditelné pod světelným mikroskopem .
7

Přidat 2 procenta aceto - orcein skvrnu v 4 kyselina octová procent . Tyto barvy jsou chromozomy . Míchá se macerací tyče . Použít krycím sklíčkem , zatlačením na squash tipy kořenové . Buď utěsnění okraje s rychleschnoucím nehet lesk , nebo trvale namontovat přípravy v Kanadě balzámu , pryskyřice z balzám jedle smíchané buď s éterickými oleji nebo xylen . Počet diapozitivy , takže výsledky budou zaznamenány , ale není zřejmé , zda je každýtestovaný subjekt nebokontrolní .
Nahrávání Výsledky
8

umístěte sklíčko na jevišti světelného mikroskopu . Zkontrolujte pole pod spodní zvětšení , přechod na vyšší zvětšení zkoumat chromozomy .
9

Zaznamenejte chromozomální aberace na listu , zaznamenávání údajů o kódované číslo pro každou cibulí . Zahrnout neúplně oddělené nebo poškozené chromozomy , mikrojader (extra jádra tvoří u konce dělení buněk , které mohou obsahovat chromozomální nečistoty ) , chromosomové kroužky a lepkavé a narušených chromozomů v různých fázích buněčného dělení . Vyfotografujte každý snímek .
10

analyzovat data pomocí statistické analýzy . Interpretace výsledků, aby posoudil , zda je či není zkušební roztok je genotoxický .