PCR Basics

Polymerase Chain Reaction ( PCR ) je metoda replikace DNA . Tato metoda je pojmenována po DNA-polymerázy , což je enzym který katalyzuje proces replikace DNA . Kary Mullis rozvinul techniku ​​v roce 1984 a získal Nobelovu cenu za chemii za jeho práci v roce 1993 . Použití PCR

Běžné aplikace PCR zahrnují DNA fingerprinting ( ve kterém DNA fragmenty jsou izolovány a ve srovnání proti existující data ) , analýza velmi malé množství vzorku ( což umožňuje vědcům rekonstruovat vyhynulých organismů a zesnulé historické postavy ) a diagnostiky ( včetně virové DNA a výzkum rakoviny ) onemocnění .
PCR komponenty

Nezbytné komponenty a činidla pro PCR reakce jsou : genomové DNA (šablona replikovat ) ; dva primery ( jeden dopředu a jeden vzad ), zdarma k sekvenci templátové DNA ; reakce koktejl ( včetně Taq polymerázy a pufru , který poskytuje životaschopný prostředí, ve kterém dojdereakce ) ; asubstrát pro enzym Taq ( nukleotidy , které vám pomohou " postavit " na jednotlivé prameny ) .

Kroky PCR

kroky reakce jsou : Denaturace ( při níž je teplota zvýšena na oddělení šablony DNA vlákna ) ; Žíhání primeru ( během níž je teplota ochlazeného na podporu volně plovoucí primer sekvence se držet izolovaných šablony DNA vláken ) ; a rozšíření (při které je Taq polymeráza ulpívá na primeru a používá volně plovoucí nukleotidy replikaci každé izolované šablony DNA řetězec ) . Opakováním tohoto procesu několikrát se izolovat každé replikované sekvence z původního templátu DNA . Každé opakování exponenciálně zvyšuje množství replikované DNA , dokud nenídostatečné množství pro požadovanou experimentu . Pro optimální teplotě a dalších podmínkách , viz " Projektování PCR programy" Yale University v roce zdroje níže.


Stages PCR

reakce může být také popsány ve třech etapách : Amplifikace ( při které je DNA exponenciálně replikovány ) ; Level - Off (při které je Taq polymeráza ztrácí aktivitu ) ; a Plateau ( v té době ne více mohou být vyrobeny v aktuálním reakce) . Pro interaktivní ukázka reakce PCR , viz University of Utah " PCR Virtual Lab " ve zdrojích níže .