PCR Basics
Polymerase Chain Reaction ( PCR ) je metoda replikace DNA . Tato metoda je pojmenována po DNA-polymerázy , což je enzym který katalyzuje proces replikace DNA . Kary Mullis rozvinul techniku v roce 1984 a získal Nobelovu cenu za chemii za jeho práci v roce 1993 . Použití PCR
Běžné aplikace PCR zahrnují DNA fingerprinting ( ve kterém DNA fragmenty jsou izolovány a ve srovnání proti existující data ) , analýza velmi malé množství vzorku ( což umožňuje vědcům rekonstruovat vyhynulých organismů a zesnulé historické postavy ) a diagnostiky ( včetně virové DNA a výzkum rakoviny ) onemocnění .
PCR komponenty
Nezbytné komponenty a činidla pro PCR reakce jsou : genomové DNA (šablona replikovat ); dva primery ( jeden dopředu a jeden vzad ), zdarma k sekvenci templátové DNA; reakce koktejl ( včetně Taq polymerázy a pufru , který poskytuje životaschopný prostředí, ve kterém dojdereakce ); asubstrát pro enzym Taq ( nukleotidy , které vám pomohou " postavit " na jednotlivé prameny ) .
Kroky PCR
kroky reakce jsou : Denaturace ( při níž je teplota zvýšena na oddělení šablony DNA vlákna ); Žíhání primeru ( během níž je teplota ochlazeného na podporu volně plovoucí primer sekvence se držet izolovaných šablony DNA vláken ); a rozšíření (při které je Taq polymeráza ulpívá na primeru a používá volně plovoucí nukleotidy replikaci každé izolované šablony DNA řetězec ) . Opakováním tohoto procesu několikrát se izolovat každé replikované sekvence z původního templátu DNA . Každé opakování exponenciálně zvyšuje množství replikované DNA , dokud nenídostatečné množství pro požadovanou experimentu . Pro optimální teplotě a dalších podmínkách , viz " Projektování PCR programy" Yale University v roce zdroje níže.
Stages PCR
reakce může být také popsány ve třech etapách : Amplifikace ( při které je DNA exponenciálně replikovány ); Level - Off (při které je Taq polymeráza ztrácí aktivitu ); a Plateau ( v té době ne více mohou být vyrobeny v aktuálním reakce) . Pro interaktivní ukázka reakce PCR , viz University of Utah " PCR Virtual Lab " ve zdrojích níže .
