Perfusion Technika

perfuzní technika umožňuje rychlé a rovnoměrné upevnění na všech jednotlivých buněk přítomných v tkáni . 4 procenta paraformaldehyd fixační prochází přes cévní systém k získání tkáně zájmu . Hlavní cílové místo pro podávání léku v konkrétním orgánu mohou být identifikovány s pomocí této techniky . Perfuze také pomohl vědcům pochopit strukturální a funkční uspořádání lidského mozku . Věci, které budete potřebovat
zvířat ( potkan nebo opice )
perfuzi čerpadla , kádinky
Fixative ( 4 procenta paraformaldehyd )
injekční jehly
perfuzi odkapávací stanovené
Nůžky
Skalpel
kleště
0,9 procenta fyziologický
Ice box
Zobrazit další instrukce dovolená 1

Připravte si čerstvý 4 procenta paraformaldehydu smícháním 40 g paraformaldehydu ve 800 ml vody . Roztok byl zahříván na 60 ° C za stálého míchání . Roztok se ochladí na 4 ° C. pH se upraví na 9,5 pomocí pH-metru . Pro úpravu pH , přidat ledovou kyselinu octovou , abyste dosáhli požadované hodnoty pH
2

Nastavit perfúzní čerpadla; . Připevněte všechny skleněné části a perfúzní jehlu . Běh 100 ml vody z vodovodu přes potrubí na perfuze čerpadla a odstraňte veškeré zbytky ze skleněných částí . Umístěte kádinku fixačním v ledové pole .
3

Otevřete konec perfuze trubky a umístěte jej do fixační kádinky . Měřítko je objem roztoku v závislosti na velikosti zvířete . Nyní nastavte perfuze čerpadla ventil na pomalé a stabilní kapání . Uzavřete ventil . Naplňte perfúzní zařízení s 0,9 procenty ( hmotnost /objem ) roztoku chloridu sodného .
4

Nastavte chirurgie nástroje u operačního stolu . Dát injekci anestézie zvířeti podle jeho tělesné hmotnosti ( ketamin 0,5 mg /kg ) . Položte zvíře na operačním stole s jeho zády dolů .
5

Vytvořte řez skalpelem , podél membrány . U velkých nůžky , tupý stranou dolů , snížit pojivové tkáně v dolní části membrány . Vystavit srdce . Držte tlukoucí srdce s kleštěmi a vložte jehlu do levé komory .
6

Otevřete ventil na perfuzní pumpy , aby průtok 0,9 procenta fyziologického roztoku . Ujistěte se, žeroztok je volně tekoucí azvíře je živý . Srdce zvířete by měla být neustále bije . Jakmile je krev nahrazena roztokem chloridu sodného, ​​roztok změní až 4 procent paraformaldehydem .
7.

zastavit prokrvení a popsala tkáni . Uchovávejte tkáně ve stejném médiu při teplotě 4 ° C.