TPA čištění Protokoly

tkáňový aktivátor plazminogenu , nebo TPA jetyp serinové proteázy , který je protein schopný zničit krevních sraženin . TPA se nachází v buňkách, které interně pokrývají krevní cévy . TPA protokoly jsou součástí farmaceutického a lékařského výzkumu na tahy , jakož i onemocnění srdce a plic , jako je plicní embolie a infarktu myokardu . Čištění TPA se vztahuje na odpojení tohoto proteinu z jiných molekul prostřednictvím řady procesů , včetně chromatografie a elektroforéza . Čištění TPA z prasečího ledvin

Tento protokol se používá ve studiích fibrinolýzy ,proces lámání produkt koagulace fibrin , vztahující se k tvorbě nádorů . Technici extrakt TPA ze směsi acetonu a suší prasečí ledviny s octanem draselným pufrem , pH 4,2 . Potom se přidá síran amonný pro indukci buněčné srážení . Dodávají n - butyl -Sepharose na vzorky , které jsou pak analyzovány na chromatographer . Concanavalinse také přidal a chromatograph.y k oddělení různých proteinů se provádí .
Čištění TPA z vaječníků čínských křečků a E. coli buněk

Protein čistota je důležitým faktorem úspěchu biologických experimentů . Vyčištěná TPA je také komerčně dostupné , a tím šetří čas a vyhnout se riziku ohrožení experiment kvůli špatně vyčištěné řešení . Tento protokol zahrnuje purifikační procesy TPA v savčích a bakteriálních buněk . Technici urychlit vzorky buněk , filtrovat je a provádět afinitu a gelový chromatografické analýzy . Později se analyzovat a srovnávat výsledky , před komerční produkce .
Vyjádření Active Human TPA v E. coli

Čeřené buněčné lyzáty jsou přidány do lysin - Sepharose , analyzovány v chromatographer a promyje roztokem chloru sodného . Další vzorek se nanese na druhou chromatografickou kolonu , obsahující proteiny, které se váže na TPA s velmi vysokou afinitou . Vzorek z druhé kolony se smísí s roztokem zinku -Sepharose . Výsledný protein vykazuje více než 90 procent čistoty , podle časopisu " Applied and Environmental Microbiology . "