Parafínový zalévací Protocol

Vědci obvykle nutné zpevnit biologické vzorky v sekci je pryč . To usnadňuje vědcům přidat barviva , protilátky a sondy na biologickém vzorku. To také snižuje překrývání různých vrstev buněk . Vědci použít parafinový vosk jako pevný matrice pro řezání , protože parafín se nemísí s vodou . Parafín jedruh uhlovodíku . Biologické vzorky obsahují vodu , takže vědci musí používat stále více koncentrované etanolu koupele vysychat vzorky . Xylen

Vědci odstraňte etanol pomocí xylenu . Pak se používají roztavené parafinový vosk k odstranění xylenu . Pro světelnou mikroskopii , že parafinové řezy jsou obvykle pět um silná . Parafín je dost těžké pro tenčí plátky . Vědci rehydrataci tkáně pomocí xylenu , pak ethanol . Potom opláchněte biologického vzorku s destilovanou vodou , aby se zabránilo kontaminaci .
Upevňovací

parafinové tkáně jsou obvykle připevňuje pomocí neutrálního vyrovnávací paměti formaldehydu , což jekomerční verze formaldehyd . To zahrnuje paraformaldehydu a methanolu , která zabraňuje formaldehyd z konverzi na kyselinu mravenčí . Tenké plátky tkáně je třeba 48 hodin při pokojové teplotě fixace optimální histologii , což je studium mikroskopické anatomie . V opačném případě budetkáň ztvrdne a křehnou . Před zpracovánímtkání je obvykle uložen v 70 procent etanolu při teplotě 4 stupňů Celsia .

Parafinové Procesory

Vědci často používají parafínové procesory k odeslání tkáň prostřednictvím lázní , které se postupně dehydratovat materiálu před horkou parafínu může vstoupit do tkání. Vědci spuštění procesoru přes noc . Procesor topí jen tkáně po určitou dobu v závislosti na tkáni , aby se nestala tvrdé a křehké . Procesor používá vakuum, které urychluje pronikání parafinu a odstraní vzduchové bubliny . Po zpracování tkáně jsou uloženy v kazetách při pokojové teplotě .
Wax tání

parafin taje po dobu jedné hodiny před přidáním tkáně . Celá kazeta se vloží do 65 stupňů Celsia, parafínové lázni po dobu 15 minut . Za studena z hliníku chladič chladí parafín po dobu 20 minut . Když se vosk praskliny nebo tkáně nejsou správně zarovnány ,vědec taje parafínu a opakuje proces .
Řezání

Při krájení tkání ,vědec dostane vodní lázeň na 35 až 37 stupňů Celsia . Voda je svěží a deionizovanou . Bloky jsou umístěny lícem dolů na ledové nebo blok chladiče po dobu 10 minut . Čepel řeže blok do sekcí . Dva problémy, které mohou nastat, jsou chudí ribboning a fragmentaci vzorky . Pokudvzorky fragment ,voda je příliš horká . Aťblok není stuha dobře , měli byste si dát ho zpátky na ledě bloku a zpevnit vosk před zahájením znovu .