Jak na skvrnu agarózovém gelu

Vizualizace nukleové kyseliny nebo proteinu je nezbytné při provádění elektroforézy na agarózovém gelu . Pokud pracujete bez barvení gelu , nebudete mít možnost vidět , kdevzorek se testuje dosáhla , a proto měření velikosti molekul , například , bude přísně omezena . Znečistit vaše gelu pomocí společného , dobře testování omezeného barviva , jako je ethidium bromid ( EtBr ), který fluoreskuje v ultrafialové ( UV ) záření , když interkalován do DNA nebo RNA molekuly . Barvivo vám pomůže při provádění experimentu tím, že ukazuje do molekuly ve vašem vzorku, tmavě modré značek . Věci, které budete potřebovat
ochranné rukavice a ochranné brýle
agarózovém gelu
Etidiumbromid
Pipeta ( Gilson pro malé množství )
Nanášecí pufr
Zobrazit více Instrukce

1

Noste ochranné rukavice, které jsou tenké, ale ochranný a nechte prsty a ruce neomezený pohyb . Použijte malý pipetu k tomu nějaký EtBr ( nebo ekvivalentní skvrny ) z jeho obalu .
2

Přidat 0,5 mikrogramů na mililitr zvolené skvrn do vzorku . Zakryjte vzorek a ručně promíchejte . Několik koktejly by měla být dostatečná .
3

Přidat záporně nabitou pufru do mixu pomocí pipety . To umožňujemořený vzorek musí být vidět pouhým okem , v přirozeném světle a eliminuje potřebu drahých , škodlivé UV záření , které by jinak rozkládat molekuly , o které máte zájem . Xylen cyanol jeběžně používaný nanášecí pufr , ale jiní jsou k dispozici . Ujistěte se, že vybrat načítání vyrovnávací paměti, která bude probíhat ve stejnou rychlostí jako molekuly , které měření . Xylen cyanol běží stejnou rychlostí jako fragmentů DNA , které jsou 5000 párů bází ( bp ) na délku .
4

Použijte čistou pipetu použít rozšířeného vzorku do jamek na začátku svého agarózovém gelu . Objem použít , závisí na velikosti gelových plástů ( a tloušťce a délce a tloušťce gel ) . Pošpinit vzorku a neovládací , takže si můžete určit parametry , které vás zajímají (např. molekulové hmotnosti ), správně a účinně .
5

Případně proveďte jižní savý jako způsob vizualizace vašeho vzorku . Přenos DNA na nitrocelulózovou membránu . Vystavit ho na hybridizační sondy . To není barvení , jako takový , ale poskytuje vhodnou alternativu , jak je popsáno Access Excellence .