N terminální sekvenování Protocol

Edman degradace -dobře známý způsob pro identifikaci N - terminální aminokyselinu bílkoviny - vyžaduje štěpení na aminokyseliny , následuje identifikace pomocí chromatografie nebo elektroforéza . Automatizované procesy urychlit N - terminální sekvenování . Fakta

Proteiny produkované uvnitř jednotlivých buněk, působí jako hormony , enzymy a dalšími důležitými regulátory . Genetická mutace vede k abnormální protein může mít vážné zdravotní následky .
Process

N - terminální aminokyselina je štěpen působením jedné z několika činidel , pak hydrolyzován tvořit samostatnou aminokyselinu . Chromatografie na tenké vrstvě , HPLC nebo elektroforézu určuje velikost aminokyseliny , a porovnává ji se známou standardní velikosti . Nová N -terminální konec zbývající proteinu může být podobně štěpen pro identifikaci .

Automatizace

Applied Biosystems vedl vývoj automatizace Edmanovým degradace , která váže čištěný protein v membráně a zachází se s fenylisothiokyanátu . Volná aminokyselina je automaticky vstřikuje do HPLC systému pro identifikaci .
Komplikací

Proteiny musí zůstat relativně čisté a bez nečistot , aby přesně určit N -terminální aminokyselinu . Limity Edman degradace vyžadují velké proteinové molekuly roztříštěn do malých peptidových řetězců ne delší 50 aminokyselin .