NBT Obsah protokoly

NBT nebo nitro blue tetrazolium jechemická sloučenina používá v biochemii a imunologii pro detekci enzymu alkalické fosfatázy . Látka je také použit v testu diagnózou chronické granulomatózní onemocnění, které má vliv na immunodefense buňky . Testovací protokoly NBT jsou imunoblotingu , BCIP /NBT alkalické fosfatázy roztoku substrátu a detekci galaktosidázy a alkalické fosfatázy aktivit v tkáni . Imunoblotingu

imunoblotingu jetechnika používaná k detekci protilátek , které jsou proteiny podílející se na procesu immunodefense , říká Susan R. Haynes v " RNA -protein interakční protokoly . " To zahrnuje použití NBT , stejně jako hovězí sérový albumin , primární protilátky 9E10 , Comassie Barvicí roztok , nitrocelulózové membrány , Tris base pufr, per- síranu amonného , dodecyl sulfátu sodného a vodou nasycený buthanol .
celým BCIP /NBT alkalická fosfatáza substrát

technici připraví roztok se tři kapky 1 procento 5 - brom - 4 - chlor - 3 - indolyl fosfát ( BCIP ) , tři kapky 1,5 procenta NBT , dvě kapky chemickou látku levamisol a alkalické fosfatázy ( AP ), pufr o pH 9,5 , v závislosti na IHC světové webové stránky . Roztok se pak inkubuje při pokojové teplotě a je k dispozici pro použití .
Detekce galaktosidáze a alkalické fosfatázy aktivity v tkáni

Galactosidases jsou enzymy, které mohou zlomit galaktosid molekuly , přítomné v bakteriích Escherichia coli a jiné organismy . Podle protokolu Online , během tohoto protokolu , biologové používají vzorky krysí buňky ošetřené PBS řešení , glutaraldehydu a paraformaldyde . Potom se připraví brom - chlor - indolyl - galaktopyranosid a X - gal reakční pufr pro vzorky s použitím hexakyanoželeznatan draselný , chlorid hořečnatý , deoxycholát sodný a detergent Nonidet P -40 . Technici mohou používat nitro blue tetrazolium ( NBT ) místo hexakyanoželeznatanem draselným jako rychlejší alternativa . Vzorky buněk se později pozorovat pod mikroskopem .