Intracelulární barvení pro průtokové cytometrie

Flow cytometrie je nástroj, který je užitečný při studiu buněčných proteinů . Využívá emise světla nebo fluorescence z proteinů v buňce . Protilátky nebo sondy oštítkované jako fluorescence se používá ke studiu specifických proteinů . Průtoková cytometrie se používá k diagnostice řady onemocnění , včetně rakoviny , ale je také užitečné při lékařském výzkumu . By měla být stanovena Upevňovací buňky

buňky s cílem zachovat stabilitu intracelulárních proteinů . Počet fixačních může být použit , jako je formaldehyd nebo ledově chladného acetonu. Po fixaci se buněčná membrána musí být permealized , abyprotilátka vstup do buňky . Prací prostředky , jako je Triton nebo NP - 40 , nebo ledový methanol může být použit , aby se otvory v buněčné membráně .


Nebarvící

Mycí buňky v blokovacím pufru 0,5 procent bovinní sérový albumin zředí ve fosfátem pufrovaném fyziologickém roztoku , PBS /BSA . Buňky se inkubují v blokovacím pufru ke snížení nespecifické vazby . Do primární protilátky zředěné v blokovacím pufru a nechá se inkubovat při pokojové teplotě , pro optimální dobu . Promyje se blokujícím pufrem .
Analysis

Inkubujte sekundární protilátky , která je značena fluorescenční značky , při pokojové teplotě po dobu 30 minut . Aby se odstranil nenavázaný praní protilátky buněk v blokovacím pufru . Spin buňky do pelety a pak resuspendujte v PBS a analyzovat na průtokovém cytometru .