MBP čištění protokoly

MBP nebo maltózu vázající protein se nachází v bakterie Escherichia coli , která je součástí střevní flóry lidí a zvířat . Čištění MBP zahrnuje řadu postupů zaměřených na separaci složek proteinu je . V molekulární biologii , čištění MBP ježivotně důležitý proces pro studium struktury a funkce tohoto proteinu . Čištění protokoly MBP jsou MBP taveného proteiny čištění , v malém měřítku MBP - fusion a maltózu vázající protein fúze čištění tagů . MBP kondenzovaných Proteiny Čištěním

Během tohoto protokolu , technici mytí 20 ml polymer amylosy pryskyřice s roztokem o pH 7,4 , chlorid sodný , merkaptoethanol ( ME ) a kyseliny ethylendiamintetraoctové ( EDTA ) Atris , v souladu s protokoly Online . Vzorky buněk se přidá , odstředí a analyzovány na gelu. Vzorky jsou analyzovány v chromatographer , kde technici eluátu nebo sledovat složky roztoku , zatímco prochází chromatografickou kolonou .
Small Scale MBP - fúzní protein Čištění

Podle hebrejská univerzita v Jeruzalémě , biologové používají činidlo isopropyl bD- 1 - thiogalaktopyranosid ( IPTG ) , spin buněčné kultury po dobu 10 minut při 8000 otáčkách za minutu na 39,2 stupňů Celsia . Později se odstraní supernatant a míchají chladnou PBS pufru na vzorku , který je rozdělen do několika zkumavek a znovu centrifugován . Vzorky jsou pak uchovávána při -112 stupňů Fahrenheita k analýze zadní .
Maltose Binding Protein Fusion Tag Čištění

Affinity značky, které jsou geneticky upravené molekuly používané v molekulární biologii pro detekci a purifikaci proteinů . Tento protokol jekomplexní soubor postupů rozdělena do tří etap , které zahrnují výstavbu značky polyhistidin bílkovin ( HisMBP ); pilot experiment vyhodnotit rozpustnost proteinu; ačištění ve velkém měřítku molekul MBP , v souladu s protokoly Nature . Na rozdíl od E. coli vzorků , technici používat ampicilin , kanamycin , IPTG , anhydrotetracyklinu , glukóza monohydrát , lýza buněk vyrovnávací paměti , DNA polymeráza , primery , Tris - acetát - EDTA a ethidium bromid .