HPLC Technika

HPLC je zkratka pro vysokoúčinné kapalinové chromatografie , standardní kvalitativní a kvantitativní analýzu postupu použitého v analytických laboratořích . HPLC je spolehlivé a opakovatelné , což jevýhodná technika pro separaci , identifikaci a kvantifikaci molekul z komplexních směsí obou chemických a biologických složek činí . Čtyři komponenty

HPLC metoda obsahuje čtyři hlavní složky . Za prvé ,rozpouštědlo dopravní systém (mobilní fáze) , který nese vzorky kolonou , je důležité, protožepolarita má vliv na schopnost systému na separaci molekul . Chromatografická kolona je obvykle vertikální skleněná kolona , která je naplněna adsorbentem . Za druhé ,adsorpční ( také známý jako stacionární fáze , protože se nepohybuje ) , je běžně silikagel nebo oxid hlinitý . Za třetí ,vzorek zavedení systému se skládá z jakési injekčního portu představit vzorek pro analýzu do rozpouštědla dodávky systému . Čtvrtou složkou jedetektor .
Detektory

typ detektoru závisí na typu vzorku technici jsou spuštěny a jaké molekuly se snaží izolovat . Kritériatechnik používá při výběru detektoru jsou selektivita , poměr signálu k šumu , detekční limit , lineární rozsah , časovou konstantu , drift a objemu buněk . Běžně používané detektory patří ultrafialové , viditelné detektory , hmotnostní spektrometry , refrakční indexy , fluorescenční detektory nebo odpařovací rozptylu světla zařízení .
Postup

Zapněte detektor , čerpadla ( které se používají k přidání tlak k pohybu mobilní fáze přes stacionární fázi ) , apočítač, který zaznamená a vytiskne se chromatogram . Vyberte si vhodné programy za účelem získání požadovaných dat . Aplikujte vzorku do vstřikovacího otvoru . Dávejte pozor na tlak . Každý typ sloupce je maximální tlak; nepřekračují to, nebo oddělení nedojde . Vytisknout chromatogram a analyzovat výsledky . Na konci každého běhu , je důležité , aby spláchla vstřikovací portu , aby se zabránilo hromadění , což může vytvořit ucpání.
Typy

hydrofilní interakční chromatografie používálepené polární stacionární fáze anepolární , mísitelná s vodou mobilní fáze oddělit molekuly založené na polaritě . Tato technika má schopnost oddělit kyselé, bazické a neutrální vzorků v jednom chromatogram.Normal chromatografie používá polární stacionární fázi a nepolární , nevodné mobilní fáze oddělit strukturních isomerů ( molekuly se stejnou molekulární vzorec, který již atomy vázané spolu v různými způsoby ) . reverzními fázemi chromatografie jenejčastěji používaným typem HPLC . Používá nepolární stacionární fáze a vodné poněkud polární mobilní fáze . Tato metoda je běžně používaný farmaceutických společností nárok drogy před release.Size vylučovací chromatografie odděluje molekuly na základě jejich velikosti, a může také určit strukturu proteins.Ion výměnné chromatografie je založena na přitažlivosti mezi ionty v rozpuštěné látky a nabitých míst vázané na pevné fázi .
používá

HPLC je užitečný v různých aplikacích . To může být použit k analýze farmaceutické materiály, což je užitečné při výzkumu nových léčiv , jakož i čištění stávající . Používá se také pro analýzu biologických tekutin , pesticidy , výbušniny a další materiály . I když jepopulární technika pro biomedicínský , biochemického a farmaceutického výzkumu , to je také používáno ve kosmetiky, potravin , životního prostředí a energetiky .