Protokol pro transfekci GFP

Použití zelený fluorescenční protein revoluci Molekulární a buněčná biologie , to dovolilo výzkumníkům představit buňky a proteiny způsobem, nikdy předtím možné . Její dopad na vědecký výzkum byl tak hluboký , že v roce 2008 Osamu Shimomura získal Nobelovu cenu za chemii za objev a izolaci GFP z fluorescenčního medúzy . Definice

gen jesekvence deoxyribonukleové kyseliny v buňkách , který je zodpovědný za produkci určitého proteinu . Plasmid jesamostatný kus DNA, která obsahuje gen , jako je GFP . Transfekce je metoda pro zavedení plazmidu do buněk .
Metody

transfekce obvykle zahrnuje smíchání DNA plazmid obsahující gen jako je GFP s lipidy nebo soli . Buňky jsou vystaveny tomuto roztoku , který vytváří otvory v buněčné membráně , což je plazmid do buňky , kde může býtgen , vyjádřeno jako protein . Komerční transfection sady jsou k dispozici , nebo reagencie mohou být vyrobeny v laboratoři . Volba metody transfekce závisí na typu buněk a plazmidů používají. GFP je vizualizovat a monitorovány zařízení, které detekuje fluorescenci .
Používá

GFP je obvykle připojena k proteinu zájmu o transfekce . Nobelův výbor vybral na sledování " poškození nervových buněk v průběhu Alzheimerovy choroby " a " jak inzulín produkující beta buňky jsou vytvořeny ve slinivce rostoucího embrya " jako příklady .