Biotinylace protokoly

Biotinylace je proces spojující biotin , nebo vitamin H , proteinu nebo jiné molekuly . Tento vědecký postup se používá hlavně v oblasti biotechnologie a molekulární biologie výzkum týkající se DNA , bílkovin a antigeny , které jsou molekuly imunitní systém je rozpozná jako vetřelci . Biotinylace protokoly zahrnují biotinylaci protilátek a peptidů , jakož i na buněčném povrchu biotinylaci . Biotinylace protilátek

Chcete-li propojit biotin na protilátky proteiny produkovat , kdyžantigen vstupuje do těla , technici použít hydrogenuhličitan sodný ( NaHC03 ) na pH 9 , dimethylsulfoxid ( DMSO ) ;

NHS - Biotin asolná látku s názvem PBS . Vzorky se smísí s roztokem hydrogenuhličitanu sodného , který se později přidá k NHS - biotinu v DMSO . Roztok se pak přidá do analyzovaných protilátky a inkubovány na části zařízení, s názvem polohovadlo po dobu čtyř hodin při pokojové teplotě nebo přes noc při teplotě 39,2 stupňů Celsia . Nakonec se roztok zředí PBS .
Cell Surface Biotinylace

biotinylaci protokolu na povrchu buněk , technici pomocí tkáňové kultury , fosforečnanem pufrovaný fyziologický roztok ( PBS ) na pH 7,4 a sulfosukcinimidyl - 2 - ( biotinamido ) ethyl - 1 ,3 - dithiopropionate roztok pufru rovnováhu kyselin obsahující aminoskupiny a TrisCl , podle Current Protocols in Protein Science.The buňky smíchány s biotinem a tlumivého roztoku , dekantuje a odstředí . Pevné obsah a specifické proteiny jsou později analyzovány na gelové elektroforézy desky .
Biotinylace peptidů

Chcete-li provést biotinylaci peptidů ,činidlo používá NHS - SS Biotin , podle Philipa Pastýře v " monoklonálních protilátek : .Practical Approach " Peptidy jsou krátké fragmenty aminokyselin , jsou molekuly, které tvoří proteiny a DNA . V tomto protokolu ,komerční řešení NHS - SS Biotin se rozpustí ve vodě . Potom se vzorek peptidu se přidá k ní , společně s roztokem hydrogenuhličitanu sodného, ​​aby se vyvážily kyselost nebo pH . Roztok se pak inkubuje na ledu po dobu dvou hodin. Technici mohou pozorovat vzorku s nebo bez molekul biotinu .