Chloramfenikol Plate Příprava

chloramfenikol ješirokospektrální antibiotikum, které zabíjí mikroby bakteriální tím, že manipulují s jejich schopnost replikovat . Toto antibiotikum bylo původně vyvinuté k boji proti infekci u lidí , ale podle Drug.com , se používá teprve nyní , jak z této publikace , jako poslední možnost , kdy jiné léky nefunguje z důvodu závažných nežádoucích účinků , jako je aplastická anémie , hypoplastická anémie , trombocytopenie a granulocytopenie . Chloramfenikol je užitečné ve výzkumné laboratoři pro experimenty molekulární biologie . Pokud je chloramfenikol připraví na talíři , může být použita k detekci bakteriální koncentrace nebo izolovat specifické kmeny bakterií pro další experimenty . Věci, které budete potřebovat
destilovanou vodou
chloramfenikol
1,0 procenta tryptonu
0,5 procenta kvasnicového extraktu
1,0 procent chloridu sodného ( NaCl ), pH 7,0
95 procent etanolu
Agar
2 - litrová baňka
magnetické míchání desky
středních míchadlem
latexové nebo nitrilové rukavice
laboratorním měřítku
autoklávu
30 sterilní 10cm talíře
modré značení pero
Parafilm
Hliníková fólie
Autoklávy pásky
Zobrazit další instrukce dovolená 1

Dejte o pár latexové nebo nitrilové rukavice připravit vývar LB . LB bujón jeběžnou zkratkou pro lyzogenie vývar nebo Luria bujónu , a to je , jak je používán jako růstové médium pro kultivaci bakterií . To může být od nuly v laboratoři , nebo ušetřit čas, který lze zakoupit u každého molekulární biologie skladě dodavatele.
2

Položte list papíru vážení na váze . Stiskněte tlačítko nulování na stupnici tak, abyhmotnost papíru není zahrnuta v konečné hmotnosti . Přidat malé množství tryptonu v době , dokudse nedostanete 10g . Pak složit vážit papír na polovinu s tryptonu ve středu . Seberte vážit papír a opatrně používat složený papír jako trychtýř přidat trypton až 2 L baňky . Tento postup vážit 5 g kvasnicový extrakt 10 g NaCl a 15 g agaru .
3

Drop míchadlo do baňky a baňka se soustředit na magnetickou míchací desku . Přidejte tolik destilované vody , aby se roztok na 1 litr .
4

Zapněte míchací destičku , a dívat se na míchadlo . Deska by měla být nastavena na správnou rychlost , abymíchací tyčinkou se pohybovat mírným tempem , aniž by se zasekl na stěnách baňky . V případě potřeby upravte nastavení . Nechte roztok sedět na desku, dokud všechna činidla se rozpustí .
5

Vypněte míchací desku , a natáhnout 3 - palcový čtvercový kus parafilmem přes horní část nádobky , aby pokrytí a baňka se chránit od všech nečistot nebo rozlití . Potom pokrytí parafilmem s kouskem hliníkové fólie a přidat kus značení autoklávu pásky na horní straně fólie .
6.

umístí roztok v autoklávu na kapalné cyklu, po dobu 20 minut při 15 psi do sterilizovat .
7

Baňka se vyjme z autoklávu . To bude velmi horký . Roztok se ochladí asi na 55 - stupňů Celsia , a nechat ho sedět při pokojové teplotě nebo vložením baňky do 65 - stupňů Celsia ve vodní lázni .
8

rozprašovačem a setřít práci povrchu s 95 procenty etanolu , aby se zabránilo kontaminaci . Je to takédobrý nápad, změnit své rukavice před manipulací s deskami .
9

Markstraně a víko z každé desky s vertikálním modrým pruhem pomocí označení pera . To znamená, že desky obsahují LB bujón a chloramfenikol .
10

Přidat dost chloramfenikolu antibiotikum k řešení tak, abykoncentrace dosáhne požadované množství , v závislosti na bakterie budete pracovat s . Společná konečná koncentrace je 100ug/ml . V této koncentraci se přidá 1mL chloramfenikolu zboží ( na 25mg/ml ) . Baňka kroužením v kruhovém pohybu , nebo jej umístit zpět na magnet, míchací desce po dobu 1 až 2 minuty, aby se ujistil, že je dobře promíchá .
11

otřete ústa baňky s ethanolem , a pak se nalije do roztoku deskami , dokud jsou plněny do poloviny roztokem . Nechte desky ztvrdnout , pokrytí každou desku s víkem a uložit je vzhůru nohama na 4 stupně Celsia , aby se zabránilo jejich vysychání .