Western blot protokoly

A Western Blot jsoutypem proteinu blot , který je používán v oblasti zdravotnictví , laboratořích biologie a dalších vědních oborů na denní bázi . Western blot, pokud je správně provedena , jsouzpůsob, jak studovat expresi proteinů ve vzorcích tkáně . Vzhledem k tomu, že mohou být rozdíly v parametrech každého vzorku , existuje celá řada protokolů , které by měly být dodrženy , aby se dosáhlo přesných výsledků . Provedení myje

Po inkubaci se membrány v řešení na protilátky na odpovídající množství času , které se liší v závislosti na protilátky roztok se používá , EnCor biotechnologie uvádí, žemembrána by měla podstoupit tři pokojovou teplotu mytí v TBS . TBS jeřešení, které má specifický make-up a pH pro praní . Membrána je třeba prát mezi každým zavedením nového řešení protilátek .
Příprava Barvení Směs

Podle WesternBlotting.org , příprava na barvení směsi bezprostředně před použitím to člen bude dosáhnout co nejlepších výsledků . Existuje několik typů barvících roztoků, z nichž některé mohou být zakoupeny a některé z nich musí být smíchány v laboratoři . Chemiluminescence barvení , podle EnCor biotechnologie , poskytuje nejvíce informací za skvrnu , ale je takénejdražší a vyžaduje temnou komoru pro rozvoj . Křenovou peroxidázou barvení a alkalická fosfatáza blotting jsou i jiné možnosti pro barvení . Bez ohledu na to , který se používá metoda , příprava směsi těsně před použitím je důležité .
Použití vyrovnávací paměti

Po použití vybraného řešení barvení , používání zvyrovnávací paměti je klíčové . V chemiluminiscence barvení , použití octanu nad horní barvícího roztoku je protokol , podle WesternBlotting.org . Křenovou peroxidázou Barvení vyžaduje použití octanu amonného pufru za účelem získání hnědé barvení výrobku . Vyrovnávací paměť používá alkalické fosfatázy blot , který by měl vytvořit fialové barvení výrobku , je složitější dělat a je možné zakoupit již .