Konkurenční Vazba Protokol Obsah

kompetitivní vazebný test jeexperiment, který určuje vazebnou kapacitu bílkovin a chemikálií pro specializované bílkoviny se nacházejí na povrchu buněk , které se nazývají receptory . Tato metoda je často používán v lékařském výzkumu , ale je také schopen určit, které léky se váží na receptory a upravovat aktivitu receptoru , což může změnit chování buněk . Cell Příprava

resuspendujte buňky do ledově chladného fosfátem pufrovaného fyziologického roztoku ( PBS ) . Měření koncentrace proteinu pro potvrzení stejné úrovně proteinu s použitím specializovaných komerčně dostupného testu proteinu .
Assay

Přidat protein radioaktivity - značený známý vázat se na receptor , ligand , na buněčné nebo tkáňové suspenze . Přidejte konkurenta , který jetest na přítomnost drog nebo bílkoviny v zkoumání a inkubujte s radioaktivním ligandem a buněčné suspenze . By měl být studovánrozsah koncentrací testovaného léčiva . Po inkubaci , samostatné vázaného a volného ligandu a měření radioaktivity .
Analýza dat

obvyklá opatření , které mají být stanoveny , je polovina maximální koncentrace, která inhibuje receptor jinak známý jako IC50 . Tento údaj se vypočítá vynesením koncentrací na logaritmické stupnici na ose X grafu , zatímcoosa Y představuje procento inhibice ; sigmoid křivka , která jeS - tvar , musí být generován . IC50 je50 procent inhibice bod , aodpovídající koncentraci lze odečíst z grafu .