Mobilní Mrazící Protocol

Ochrana buněk prostřednictvím zmrazení je zásadní pro výzkum , veterinární medicína a chov zvířat , protože umožňuje buňkám , které mají být skladovány dlouhou dobu . Způsob zmrazení vybrané , však musí omezit nebo zabránit poškození buňky . Kryokonzervace prostředek a metoda může záviset na typu buněk . Příprava

Buňky by měly být zmrazeny , pokud jsou zdravé a aktivně roste s 90 procent životaschopnosti je . Je třeba dbát na manipulaci a vysokorychlostní centrifugací a je třeba se vyhnout energický pipetování nebo odsávání pro udržení životaschopnosti a zabránit buněčné poškození .
Kryoprotekce

kryoprotekce agent používá jako náhrada za intracelulární vody . Činidlo zabraňuje ledových krystalů a dehydrataci vyskytující se v buňkách . Sterilizovaná glycerol a sterilizovány dimethylsulfoxidu jsou často používány v koncentraci 5 procent na 15 procent ( objem na jednotku objemu ) se zředí v obou fetální telecí sérum nebo růstového média , v závislosti na typu buněk .
Zmrazení a skladování

Buňky v mrazicí směsi by měla být pomalu ochladí . Pokud je programovatelný mrazák není k dispozici , kryovialek lze zabalit do tkáně nebo umístěny v polystyrénu , který může zpomalit proces zmrazení . Buňky by měly být uchovávány na minus 80 stupňů Celsia po dobu 24 hodin a pak se přenesl do tekutého dusíku pro dlouhodobé skladování .
Rozmrazování

mražené buňky je třeba rozmrazit rychle . Vodní lázeň nastavená na 37 stupňů Celsia lze použít . Péče by měla být přijata s buňkami uloženými v kapalném dusíku , nicméně, jak kapalný dusík může vstoupit do lahvičky a mohou explodovat na rozmrazení . Směs zmrazení se ředí v růstovém médiu . Životaschopnost buněk by měly být posuzovány s barvivem trypanové modrou a buňky kultivované jako normální .