Retrovirus infekce protokoly

obsahující RNA genom , který je zapouzdřen v kapsidu a lipidového obalu , retroviry obsahovat polypeptidových řetězců , které pomáhají spojit je na receptory v membránách hostitelských buněk , které infikují . Vzhledem k tomu, dědičné informace většině buněk " je kódován v DNA , které retrovirů je obsažen v RNA; retroviry také nesouenzym reverzní transkriptázy , což jim umožňuje držet hostitelské DNA . Některé protokoly jsou následně v laboratořích v cílevědomé infekce DNA buňky s těmito viry . Příprava na laboratorní

některé laboratorní vybavení a zásoby jsou nezbytné k pomoci v procesu retrovirové infekce . Zařízení obsahuje 1 pipety pomoc , 1 pipeta - muž , 1 tkáňové kultuře kapuce , 37 stupňů Celsia a 32 stupňů Celsia inkubátory , a Eppendorf centrifugu . Dodávky zahrnují destičky pro tkáňové kultury , jednorázové Pasteur pipety , kvalifikovanou retroviral supernatant , filtrem sterilizovaný polybrenu a filtrem sterilizovaný protamin sulfát .
Příprava buňky pro infekce

Prior k infekci , musí být cílové buňky rozděleny na tkáňové kultury destičky a inkubovány přes noc v 37 stupňů Celsia inkubátoru s pěti procent CO2 . Účelem této inkubační doby je vytvořit buňky, které jsou 50 % konfluentní . Příprava buněk předem , je nutné zajistit, že buňky jsou optimalizovány pro infekčního procesu . Nolan Lab na Stanfordově univerzitě doporučuje, aby se infekce buňky začínají vždy začít tím, že nakazí buňky NIH 3T3 pomoci optimalizovat výsledky testu .
Infikování buňky

Poinkubační doba je u konce , by měly zajistit, výzkumníci , že buňky jsou obě zdravé a pravé soutoku . Pomocí tkáňové kultury kryt ,buněčná hmota se odsaje a virový supernatant se aplikuje na buňky . Po nanesení ,deska by měla být jemně houpal sem a tam , aby se zajistilo, že je rovnoměrně rozložena . Buňky by pak mělo být spin - naočkují tím je do Eppendorfovy odstředivky a odstřeďování je při 2500 otáčkách za minutu po dobu devadesáti minut při teplotě 30 stupňů Celsia . Poté , buňky by měly být inkubovány při teplotě 32 stupňů Celsia po dobu jednoho až dva dny. Virus je poté nahrazen extrahovaných buněk a umístěna do inkubátoru , které mají být analyzovány kdekoli tři-sedmdny po počáteční infekci .