Jak se připravit na agarových plotnách

Molekulární biologie a bakteriologie použití agarové plotny se kultury mikroorganismů, jako jsou bakterie pro experimentování . Agar jelátka, která tuhne , nebo gely ,tekuté živné médium vyžaduje mikroorganismem přežít a růst . Jakmile se přenese do agar bakterie rostou v různých kolonií ( v případě, pěstované při nízkých koncentracích ) , nebo nátěrů ( v případě, pěstované ve vysokých koncentracích ), a může být sklizena pro analýzu . Biologové přípravu agarových plotnách , jak tento proces vyžaduje přístup k činidel laboratoř - grade a strojů a dobrou znalost molekulární biologie a sterilních technik . Věci, které budete potřebovat
Rukavice
Lab Coat
obličejová maska ​​
Bunsen hořák
laminárním prouděním
sterilní Petriho misek
10g bakto - Trypton
5 g kvasnicový extrakt
15 g agarózy
1 ml 1N NaOH
sterilní destilované vody
Skleněná láhev
autoklávu páska
autoklávu
doplňky , např. antibiotika jako ampicilin
Zobrazit další instrukce
1

kladen na řádné ochranné prostředky , včetně rukavic , laboratorní plášť a masku , a dekontaminaci všechny povrchy . Práce vedle Bunsenovým hořákem nebo s výhodou ve sterilní digestoři s laminárním prouděním . Tím se zabrání vzduchu nečistoty z pádu do agaru .
2

Vyjměte stoh Petriho misek z obalu , ale šetřit na zabalení agarových plotnách . Označte vnější povrch misky (nevíko ) s typem agaru a dnem sestavení . Položte desky se jako jediná vrstva s víčky odstraněny , aby vylévání agaru jednodušší .
3

Smíchejte Bacto - trypton , kvasnicový extrakt a agarózy dohromady a přidejte hydroxid sodný roztoku ( NaOH ) . Do sterilní destilované vody k získání 1 litru živné půdě . Tento roztok se převede do skleněné láhve s alespoň objemu 1.5l . Volně šroub na víku lahve a označit datum výroby a název média . Umístěte pás autoklávu pásky na láhve a autoklávu to po dobu 25 minut . Nechteláhev pohodě ne nižší než 45 stupňů Celsia ( nebo to ztvrdne předčasně ) , ale ne vyšší než 50 stupňů Celsia . Můžete si uložit lahví ochladí a ztuhne agaru při 4 ° C a pak v teple až do zkapalněný . Pokud je to nutné pro konkrétní experiment nebo kmen bakterií , přidejte vhodný typ a množství doplněk jako antibiotika . Pokud je médium příliš horká , budou doplňky zničena , tak pečlivě zkontrolujte teplotu média před pokračováním .
4

nalijte dostatečné množství agaru na půl naplnit misku , zatímcoagar je ještě teplé a zkapalněný . Ujistěte se, žepovrch je zcela pokryt . Nelijte příliš velké množství nebo nechatagar dostat na vrchol paraboly . Udržujte desky ve sterilním prostředí tím, žehořák Bunsen nebo laminární proudění kapuce na nepřetržitý provoz . Nechte desky pro nastavení a pak nahradit víčka .
5

suší agarových plotnách po dobu asi 30 minut až jednu hodinu v peci nastavit ne vyšší než 37 stupňů Celsia . Případně můžete nechat v laminárním prouděním po dobu tří minut , nebo na dekontaminovaného laboratorním stole v low- pěší zóna , která není průvan za den nebo dva . Sušení desky se zastaví jakoukoli bakteriální řešení, které se na povrch agaru z jednoduchým zředěním ven a sklouznutím , namísto tvořit kolonie , které se drží na agaru .
6

pečlivě ukládat desky vtemnu při 4 stupně Celsia . Stack sušené agarových plotnách s jejich dna až k vám umožní jasně vidět štítky a aby se zabránilo mikroorganismy a nečistoty z pádu na povrchu agaru a jejich kontaminaci . Vložte nádobí zpět do jejich obalů , přikryjeme alobalem a slepte obalový zuby. Označte zabalené desky s jejich obsahem a dnem sestavení . Můžete ukládat desky pro až dva měsíce a měla by se jich zbavil po tom .