Cell Lysis Protokol pro izolaci proteinů

Malé proteiny mohou být připraveny synteticky , ale z mnoha důvodů není syntetické stroje lepší než buňky samotné . Typicky , je prvním krokem v izolaci bílkovin je buněčná lýza . Lýza buněk na
V lýze buňky ,membrány kolem buněk protrhne .

slovo " lysis " pochází z řeckého kořene smyslu " se uvolnit . " V lýze buněk , síly , které drží buněčnou membránu dohromady jsou narušeny , což způsobuje , že k prasknutí . Obsah buňky se pak uvolní do okolního roztoku , včetně proteinu . Obvykle se provádí přidáním chemického roztoku s názvem lyzační pufr .
Příprava lyzačního pufru dovolená Volba lyzačního pufru bude záviset na typu buněk , bílkoviny a aplikací .

nesčetné množství různých lyzačních roztoků jsou komerčně dostupné , nebo společné recepty mohou být použity pro přípravu lyzačního pufru z běžných chemikálií . Nejlepší pufr pro použití se bude lišit v závislosti na použitém typu buněk ,proteinů , které mají být izolovány a konečné aplikace , ale obecně ,lyzační roztok obsahuje detergentní molekuly ( často NP- 40 nebo Triton -X ), který se rozpustí buňku membrány , spolu s pufry , chelátorů a inhibitory proteázy , aby se zabránilo bílkoviny před poškozením jednou propuštěn z ochranného prostředí buňky .

lýze podmínky
múzických rozpadu pod studený jako led podmínky zabraňuje poškození proteinu zájmu .

Lysis pufr se obvykle používá ledová , aproces lyzačního se nechá probíhat za studena . Roztok se mírně houpal na podporu i rozptýlení buněk a lyzačních výrobků . Po 5 až 10 minutách se lyzační roztok je obvykle neutralizuje , aby se zabránilo další činnost . Tato opatření snižují poškození proteinu a snížení množství cizích úlomků produkoval , který bude mít později musí být odstraněny .
Další lýze metody
Mechanická síla může být použit také k lýze buněk .

když chemická lýza jenejjemnější a nejčastěji používané , tvrdší mechanické metody pro lýzu buňky mohou být použity v některých případech . Mezi ně patří ultrazvukové vibrace , opakované zmrazování a rozmrazení a homogenation , což jeproces rmutování . Obraťte se na odbornou literaturu najít nejvhodnější metodu pro konkrétní případ .