PBMC Protocol

Kryokonzervované mononukleární buňky periferní krve ( PBMC ) jsoučastým zdrojem vzorků pro výzkum , který zahrnuje imunoterapii a reakce na vakcíny . Zatímco některé protokoly jsou omezeny na izolaci a zmrazení fázích procesu , jiní zahrnují rozmrazování postupy . Izolace Řízení a tuhnutí řízení

komerční Sloučenina pro podporu oddělení je umístěno do každé centrifugační zkumavky 50 ml a zkumavky se centrifugují po dobu třiceti sekund. Caps krevních zkumavek se postříkají alkoholem před otevřením , pak antikoagulační ošetřené celé krve se pak převede pipetou do centrifugačních zkumavek . Plazmatická vrstva krve odsaje pipetou .
Freezing

Buňky z předchozího kroku se pak odstředí s fyziologickým roztokem pufrovaným třikrát . Po počet buněk , budou vzorky se odstředí potom suspenduje v mrazicí médium . Vzorky v mrazicí médium se vedle rozděleny mezi kryovialek v jednom částky ml . Lahvičky jsou uloženy přes noc do mladého

-70 ° C mrazáku a přestěhoval se do dlouhodobé skladování v kapalném dusíkupříští den .
Safe Rozmrazování

kryovialek jsou převedeny z kapalného dusíku na 37 ° C ve vodní lázni a vzorek se nechá rozmrznout jedno až dvě minuta . Teplý transport média se přidá do každé lahvičky . Zředěný Buněčná suspenze se odstřeďuje po dobu sedmi min. Počet a životaschopnost buněk jsou kontrolovány , Pokud buňky potřebují soustředit , jsou vzorky centrifugovány sedm minut. Vzorek se ředí do pracovního roztoku a odpočíval dvanáct-osmnácthodin před započetím zkoušky v určeném protokolu .