Jak si vyrobit restrikční mapa

V počátcích molekulární biologie , vědci běžně používá mapování omezení pochopit geny byly studují . V moderních výzkumných laboratořích , mapování omezení je velmi zastaralý , neboť sekvenování stal se více široce dostupné a úspornější než v minulosti . Nicméně, tam jsou případy, ve kterých můžerestrikční mapa dostačující pro výzkumníka provést své šetření . Celkový přístup k restrikčním mapováním zahrnuje použití trávicích enzymů rozebrat fyzicky vzorku DNA . Jakmile budete měřit produkty tohoto trávení , můžete " znovu složit " na kusy a odvodit původní sekvenci DNA . Věci, které budete potřebovat klipart restrikčních enzymů klipart vzorku DNA
tlumivý roztok
led a horká vodní lázeň
Gelová elektroforéza zařízení
Zobrazit další instrukce
DNA Trávení

1

Přidat restrikční enzym do vzorku DNA . Použijte EcoR1 , běžně používané enzym , například .
2

Přidat tuto směs do tlumivého roztoku , což je v podstatěmístem pro reakci nastat .
3

zvýšení teploty reakční směsi , jak je uvedeno v uživatelské příručce New England Biolabs . Každý restrikční enzym má specifickou reakční teplotu, při které se nejlépe funguje . Navíc , každý enzym má specifickou sekvenci nukleotidů je navržen tak, aby cíl. EcoRI bude skenovat a snížit DNA na nukleotidové sekvence CAATTC . Toto přesné pořadí nukleotidů , musí existovat enzymu vázat a snížit DNA . Až do tohoto bodu , všechny materiály by měly být udržovány na ledu , aby se zabránilo nežádoucí aktivitu .
4

Po ponecháníreakce nastat , jak je uvedeno v návodu , spustit směsi v gelové elektroforézy stroj oddělit DNA fragmenty v závislosti na velikosti . Nejmenší fragmenty budou pohybovat nejdál přes gelu .
5

Změřte ujetou vzdálenost každého fragmentu DNA . Těchto pět kroků by měl být opakován s několika různými enzymy samostatně .
Konstrukce omezení Mapa
6

Pomocí dat získaných z gelu , shromažďovat veškeréinformace, které jste našli použití různých restrikčních enzymů .
7.

odvodit pořadí restrikčních míst srovnáním různých délek fragmentů produkované každý enzym . Například , je-li enzym # 1 vznikly dva fragmenty stejné délky a enzym # 2 produkoval tři fragmenty stejné délky , lze uzavřít , že enzym, # 1 řezy v polovině DNA a enzymu # 2 kusy DNA do třetiny . Celým
8

Použití závěry uvedené v kroku 2 , sestavit pořadí restrikčních míst na DNA .