Metody měření NADPH - oxidáza

enzym NADPH oxidáza je identifikován jako výrobce reaktivních forem kyslíku v průběhu procesů, včetně růstu buněk hladkého svalstva cév . Tyto reaktivní formy jsou spojeny s celou řadou onemocnění, včetně hypertenze , diabetes, rakovina a zánět , metody pro sledování aktivity tohoto enzymu je rozhodující pro možný vývoj léčby. NADPH oxidázy

NADPH oxidáza patří do skupiny enzymů , které pomáhají při přenosu elektronů mezi NADPH a kyslíku. Nicméně , NADPH oxidasy má jedinečnou schopnost produkovat reaktivní formy kyslíku z této reakce , ve srovnání s ostatními členy rodiny , kde reaktivní formy kyslíku jsou generované pomocí jiných prostředků . Multimerní komplex protein , NADPH oxidáza se skládá z membrány vázané flavocytochrome b558 , který se používá jako marker pro měření.
Reaktivní formy kyslíku ( ROS ) Generation

hlavním zdrojem ROS , zejména peroxidem vodíku , NADPH oxidázy produkuje malé, ale konzistentní množství přes jeho izoformy vyjádřená v cévách , které jsou zapojeny do signálních procesů . Tato důsledná výroba může nakonec přemoci přirozené antioxidační systém , což způsobuje ztrátu ochranných sloučenin, jako jsou oxid dusnatý agenerace ještě výkonnější ROS .
Chemiluminescence Metoda

Chemiluminescence umožňuje vysoce citlivé , automatické měření NADPH oxidázy činnost nad rozsah koncentrací . V této metodě , NADPH substrát se přidá ke vzorku tkáně , který obsahuje NADPH oxidázy . Po reakci , ROS je generován a reaguje se sloučeninou lucigenin produkovat chemilluminescent efekt, který se měří . Luminiscence je přímo úměrná aktivity NADPH oxidasy , jakoenzym určuje rychlost reakce .
Kinetic Assay pomocí průtokové cytometrie

V této metodě , jsou analyzovány vzorky tkáně pomocí průtokové cytometrie . Kostní dřeň se oddělí od vzorku s použitím Hanks ' Balanced Salt Solution . Specifické skvrny a detekci protilátky se přidá k vzorku v polystyrenových zkumavek . Vzorek se pak inkubuje , promyje se Hanks ' Balanced Salt Solution, označené molekulárních sond a připravený z průtokové cytometrie . Kontrolní trubky jsou také pro srovnání a kalibrovat průtokový cytometr . Stroj je pak běžel a zaznamenána měření .