Rozdíl mezi přímým a nepřímým testem ELISA

enzyme-linked immunosorbent assay ( ELISA ) zahrnuje reakci komplexu protilátka - enzym s antigenem nebo protilátkou se konala nehybně na pevném povrchu . Na inkubaci enzymu konjugovaného s vhodným substrátem ,produkt je tvořen . Tvorba produktu pomáhá odhalit přítomnost antigenu nebo protilátky , a jeho množství je měřítkem množství reakce antigen-protilátka , která nastala . Test ELISA může být provedena ve dvou formách : přímé a nepřímé . Zkušební Formát

V přímém testu ELISA ,primární protilátka se koná na stěnách mikrotitrační destičky . Po přidánívzorku podezření , že obsahují antigen , je reakceantigen - protilátka . Dále ,enzyme-linked sekundární protilátka, která je schopna reagovat s antigenem se přidá . Je-li ve vzorku přítomen antigen , se váže na tento enzym - spojené protilátky . Po přidáníbezbarvý substrát , pokudzabarvení , znamená to, že přítomnost antigenu . V nepřímé ELISA antigen se koná na stěnách mikrotitrační destičky . Po přidánívzorku podezření, že obsahuje protilátky , dojde k reakciantigen - protilátka . Dále ,enzyme-linked sekundární protilátka schopná reakce s nevázané oblasti protilátky se přidá . Po přidáníbezbarvý substrát , to vede k rozvoji barvy , pokudvzorek použitý obsahuje protilátky .
Snadné testování

široká škála značených sekundárních protilátek jsou komerčně k dispozici . Kromě toho , že je možné vytvořit několik primárních protilátek v určitého druhu a stejným sekundární protilátky pro detekci . To jenepřímá ELISA snadno proveditelné . V přímém ELISA , primární protilátky musí být zvlášť připraveny reagovat se specifickým antigenem podezření , že je přítomen ve vzorku . To jepřímá ELISA nevýhodné ve srovnání s nepřímým testem .
Rychlostí testování

přímé ELISA test je rychlý ve srovnání s nepřímým testem , protože to používá pouze jednu protilátku . Nepřímá ELISA vyžaduje další krok inkubace s druhou protilátkou během zkušebního postupu , což způsobuje zpoždění při získávání výsledků .
Citlivost

přímé ELISA test je méně citlivé než nepřímé formě testu , protože je mnohem méně zesílení signálu . Kromě tohooznačení primární protilátky s enzymem může zhoršit jeho immonoreactivity profil . V případě nepřímého testu ELISA ,primární protilátka není označen , a proto , že si zachovává svůj imunoreaktivitu . Kromě toho , každá primární protilátka má mnoho epitopů , které se mohou vázat s sekundární protilátkou , což umožňuje zesílení signálu , zlepšuje citlivost metody. Nicméně, tam ješance, zkřížené reaktivity mezi antigenem a sekundární protilátky , což vede k chybě ve výsledcích . Není tam žádná taková možnost v přímém metodou ELISA .