Genetické protokoly
genomové DNA poskytuje plán pro buňky organizovat do živých organismů . DNA obsahuje čtyři opakující dusíkatých bází tzv. adenin , guanin , cytosin a thymin . Vědci úspěšně určit celou sekvenci bází , genom , pro mnoho složitých organismů včetně člověka . Existuje mnoho důležitých důvodů, proč sekvenci genomu . Lékařská genetika se zabývá objevem genetických abnormalit způsobují onemocnění, jako je diabetes , Alzheimerovy choroby a rakoviny . Evoluční genetici porovnání genomů od příbuzných druhů rozvíjet přesné taxonomii . Základní genetické protokoly v oblasti výzkumu jsoustejné bez ohledu naúčel výzkumu . Izolační DNA z buněk
Genetický výzkum vyžaduje extrakci vzorku čisté DNA z buněk . Základní protokol začíná narušením a odstranění ochranné přípravky na buněčných stěn nebo zvířecí buněčné membrány s enzymu lysozymu . Non- genetické komponenty buněk ve formě sraženin jsou odstraněny rychlou spřádání s odstředivky , zatímco DNA zůstává v roztoku . DNA se pak vysráží v přítomnosti octanu sodného soli s ethanolem . Závěrečná centrifugace sraženiny a pelety čistý genetický materiál pro výzkumné účely .
Polymerázová řetězová reakce
Genetický výzkum vyžaduje dostatečný počet kopií určených oblastí DNA . Polymerase Chain Reaction , PCR nebo , je způsob výroby exponenciálně kopií DNA . Protokol vyžaduje, aby čištěné DNA , Taq polymerázy , základy tzv. deoxynukleotidy a malé řetězce DNA na prime na určeném místě . Reakční směs se umístí do termocykleru , nástroj schopný rychlé změny teploty. Zahřívání směsi na 95 stupňů Celsia se oddělí dvouřetězcové DNA , pak se ochladí na 48 stupňů, aby primery mohou sedět , nebo žíhání , na odpovídající bází . Teplota se zvýší na 72 stupňů , kdy Taq polymerázy montuje deoxynukleotidů , tzv. rozšíření , do nové kopie DNA .
Genetické DNA sekvenování
Sekvenční data se zobrazí jako barevný pásy s vyznačením DNA bází .
Automatizované sekvenování se používá k určení přesné sekvenci bází a tyto normální s abnormální DNA . Protokol přidává fluorescenčně značeného dideoxynukleotidy nebo ddNTP , na normální PCR reakce , které se náhodně zastaví prodloužení DNA fragmentů . Tyto výrobky jsou DNA fragmenty různé jedinou základnou . Každý základní typ má jinou barvu . Konečné produkty jsou naložena na automatizovaném sekvenátoru , nástroj určený k separaci fragmentů podle velikosti na polymeru pomocí elektrického proudu . Když fragmenty dosažení polymeru koncový bod ,digitální fotoaparát zaznamená základní barvu a odešle data do počítače pro analýzu .
Genotypu a DNA fingerprinting
DNA otisky prstů slouží k identifikaci člověka zůstává .
genotypu jemetoda, která porovnává malé segmenty genomu z jednoho organismu do druhého . Cílem je objevit malé rozdíly ve velikosti PCR fragment vyplývající z normálních nebo náhodné základních změn v DNA . Konstrukce protokol začíná se základním PCR za použití jedné fluorescenční značené primer pro detekci na automatizovaných sekvencery . Značené výrobky jsou odděleny podle velikosti a zaznamenán digitálním fotoaparátem do počítače pro analýzu . Genotyping protokoly jsou určeny pro forenzní identifikaci , DNA fingerprinting a otcovství nebo identifikaci genetických abnormalit , které vedou k onemocnění .
