Jak otestovat Koncentrace amylázy Enzymy

amylázy enzymy jsou produkovány slinivkou břišní a ve slinách žlázy a pomáhají trávit a zpracovávat sacharidy . Kdyžslinivky břišní se stává nemocné , amyláza se uvolní do krevního řečiště . Je-lipacient potíže zažívacího traktu , nebo je onemocnění slinivky břišní , budelékař nařídit krevní test ke stanovení hladiny amylázy v krvi . Sledování hladin amylázy enzymů přinese mnoho informací o progresi onemocnění a účinkům léčby . Věci, které budete potřebovat
UV /Vis spektrofotometru
15 velkých zkumavek
Stojan na zkumavky
1 mg /ml roztok škrobu
deionizovaná voda
KI /jódu činidlo
pipety
kapátko
Tissue
kyvety
milimetrový papír
vzorek krve
odstředivka
Stopky
Zobrazit další instrukce
Příprava škrobu normy křivka
1

Zapněte spektrofotometru a nastavte ji na vlnové délce 620 nm . Nechtepřístroj zahřát po dobu minimálně 10 minut , takžeodpověď bude stabilní během experimentu .
2

Vydejte se šest zkumavky , označte je 1-6 a umístit je v testu tube rack . Uspořádat řešení škrobu , deionizovanou vodou a KI /roztoku jodu na pracovním stole
3

trubice 1 Naplňte 3 ml deionizovanou vodou pomocí pipety . ; bude sloužit jakoprázdné . Naplňte zkumavky 2-6 s 3,0 ml, 2,9 ml , 2,7 ml , 2,4 ml a 2,1 ml deionizovanou vodou , resp . Přidat škrobový roztok do každé ze zkumavek 2-6 v následujícím pořadí : trubka 2 dostane 0 ml , trubka 3 dostane 0,1 ml , tuba 4 dostane 0,3 ml , zkumavka 5 dostane 0,6 ml a trubka 6 dostane 0,9 ml
<. br > 4

Přidá se jedna kapka KI /roztoku jodu na každé ze šesti trubek. Před nahráváním jejich absorbance spektrofotometrem důkladně důkladně promíchejte každou zkumavku .
5

Naplňte kyvetu se slepým roztokem , očistěte vnější povrch kyvety a vložte jej do prázdného otvoru spektrofotometru . Nastavte absorbance na nulu . Všechny ostatní řešení přinese pozitivní absorbance .
6

Vyplňte vzorku kyvetu s každým z dalších pěti řešení v pořadí . Před každým měřením Otřete vnější části kyvety . Zaznamenejte hodnotu absorbance pro každé zkumavky . Opláchněte kyvetu s novým řešením alespoň jednou před naplněním pro zkoušku .
7

Vytvořte graf, který zobrazuje hodnoty absorbance proti koncentraci škrobu . Jedná se o standardní křivka, která umožňuje určit koncentraci roztoku , který má danou absorbance .
Stanovení amylázy Koncentrace
8

Vyčistěte všechny zkumavky od první část testu . Ponechat prázdné trubice pro pozdější použití .
9

získat vzorek krve od pacienta . Vzorek se umístí v centrifuze a oddělení červených krvinek od krevní plazmy .
10

Naplňte zkumavky s 9 ml deionizované vody a 1 ml krevní plazmy . To je1:10 ředění plazmy . Smíchejte trubku důkladně a pipety 1 ml tohoto roztoku do druhé zkumavky . Označte dvě zkumavky s jejich obsahem .
11

Připravte provést měřeného testu . Mají stopky ruce a nastavit sedm zkumavek s kyvety ve stojanu zkumavky . Budete mít hodnoty každé dvě minuty , jakmile se spustí test . Zaznamenejte přesný čas a absorbance pro každý ze sedmi datových bodů . Naplňte každý ze sedmi zkumavek s 2 ml deionizovanou vodou .
12

Přidat 9 ml roztoku škrobu do zkumavky , která má 1 ml ředění 1:10 plazmy . Jakmile začnete přidávat roztok škrobu , spustí se stopky . Smíchejte zkumavku dobře a pipety 1 ml škrobu /plazmy roztoku doprvní ze sedmi zkumavek . Zaznamenejte dobu . Přidejte 1 kapku KI /roztoku jodu do zkumavky a promíchejte .
13

přenést do kyvety , otřete vnější a zaznamenejte absorbanci . Tento postup opakujte se zbývajícími šesti zkumavek ve dvou minutových intervalech . Na závěr měřeném testu byste měli mít hodnoty pro aktuální čas a absorbance pro časové rozpětí od 0 , 2 , 4 , 6 , 8 , 10 a 12 minut.
14

použijte standard křivka najít koncentraci škrobu pro každou ze sedmi datových bodů . Tyto body se snižuje s časem . Amyláza štěpí škrob a časem spotřebuje všechnyškrob k dispozici .
15

Graf datové body pro měřeném testu jako koncentrace škrobu v závislosti na čase . Sklon této křivky udává množství amylázy ve vzorku plazmy .