Šíření rekombinantních plazmidů

Nalezeno v některých bakterií a kvasinek druhu , plasmidy jsou poměrně malé , samostatně se replikující kroužky DNA nacházející se mimo hlavní chromozomu dané buňky . Jsou velmi užitečné v genetickém inženýrství , protože je poměrně snadná spojovatelnost vybrané geny z jiných druhů, do plazmidů , jejich přenos mezi hostitelskými buňkami ze stejného nebo různého druhu , a stimulovat je replikovat - nebo šířit - na mnohem vyšší , než se - normální - se zesilovačem nebo - ceny . Rekombinantní plasmidy jsou pouze ty, které byly navrženy tak , aby obsahovaly geny z jiných druhů. Zejména s větším šíření , rekombinantní plasmidy mohou rychleji a snadno expresní požadovaných proteinů ve velkém , průmyslovém měřítku. Věci, které budete potřebovat
již existující plasmidů a genových knihoven , nebo plasmidů a geny jste izolovaných sami ze svých hostitelských organismů a slepen
buněčné kultuře zařízení
Amplification prostředek ( y) , jako je chlorid vápenatý , úrazu elektrickým proudem , chladu a tepla , chloramfenikol , úrazu elektrickým proudem a /nebo Taq polymerázy enzymu
Zobrazit další instrukce dovolená 1

Vyberte postup amplifikace, ani postupy, které nejlépe vyhovuje specifické rekombinantní plazmid a hostitele organismus . Některé postupy fungují lépe s určitými plasmidů a počítačů než s ostatními . Pokud pracujete s románem , stále experimentální rekombinantního plasmidu a /nebo se snaží zrůzných druhů hostitelů , budete muset určit nejlepší postup zesílení nebo procesů prostřednictvím pokusů a omylů .
2

zkuste proces nazývaný transformace , pokud se vaše specifické plasmidy a hostitelské buňky druhy by mohly reagovat na něj . Chill buňky a plasmidy na nula stupňů C v roztoku chloridu vápenatého ( CaCl ) . Rychle zvýšit teplotu na 37 - 43 stupňů C. Tato náhlá změna teploty způsobí, že buněčné membrány , aby se větší množství plasmidu .
3

Poslat vysokonapěťové elektřiny pulsy prostřednictvím řešení plasmidů a buněk , pokud je elektroporacepožadovaný způsob amplifikace . Tato technika zvyšuje permeability buněčné membrány pro plasmidů .
4

Vystavit hostitelské buněčné kultury k nízké úrovni antibiotika chloramfenikol generovat tolik jako sto plasmidů na buňku . Tato metoda potlačuje replikaci hlavních chromozomů hostitelské buňky a současně vyvolání nekontrolované replikaci plasmidu , včetně genu sestřižené do něj .
5

Použít polymerázové řetězové reakce nebo metoda PCR pro generování plasmidu kopií na velmi vysokých řádů . PCR je založena na DNA polymeraci , chemické reakce , kterými genetické sekvence tvoří v přírodě . PCR se nejčastěji katalyzována tepelně stabilní enzymu Taq polymerázu , extrahované z několika druhů bakterií , které žijí v horkých pramenech .