Protokoly pro Hoechst Barvení

Hoechst skvrny jsou fluorescenční barviva používaná pro označení DNA a RNA pomocí fluorescenční mikroskopie a průtokové cytometrie techniky . Hoechst 33258 a Hoechst 33342 arnejpoužívanější těchto skvrn . Mají schopnost vázat se na molekuly DNA , což způsobí, že jádra a mitochondrie , aby se fluorescenční pod ultrafialovým světlem . Protokoly pro Hoechst barvení jsou běžnou praxí v biotechnologických a genetických laboratořích , a zahrnují buněčné barvení techniky, jak s pomocí Hoechst 33258 a Hoechst 33342 . Hoechst 33342 HSC barvení a kmenových buněk purifikaci

Tento protokol se používá na skvrnu buněk z myší kostní dřeně . Technici připravit vzorek kostní dřeně s roztokem HBSS + soli , pufru HEPES a fetálního telecího séra . Oni točit řešení a přidat do předehřátého DMEM médiu . Hoechst skvrna se pak přidá . Roztok se umístí do vodní lázně 98,6 stupňů Celsia na přesně 90 minut zprávyÚstav imunologie na University of Pittsburgh . DNA segmenty zobrazují zářivka pod cytometru .
Hoechst 33342 DNA Barvení

Během tohoto protokolu , technici pozastaveno Hoechst 33342 skvrna v destilované vodě , přidáme 2 procenta fetální telecí sérum na buněčný vzorek , udržování pH na 7,2 pomocí roztoku pufru . Buňky se pak inkubují při teplotě 98,6 stupňů F po dobu jedné hodiny , a okamžitě analyzovány části zařízení s názvem cytometru . Celým

Stained DNA je pak viditelný a fluorescenční , v závislosti na University of Michigan zdravotnického systému . Celým

detekce DNA pomocí DNA - vázající fluorochrom Hoechst 33258

protokoly používané kus zařízení s názvem spektrofotometr pro analýzu DNA a RNA segmenty . Technici pomocí Hoechst 33258 Pracovní roztok a telecí brzlík vzorky DNA . Oni také oddělený řešení pomocí vzorku DNA a chemické látky zvané ethidium bromid . Později se porovnat výsledky obarvení buněk v obou médiích , pomocí spektrofotometru , podle Current Protocols in cytometrie .