Adherentní buňky Protocol

Buňky v kultuře jsou buďformou kultivovány v suspenzi , jako je například krevní buňky , nebo buňky , jako jsou fibroblasty , které vyžadují povrch, na který se mohou dodržovat . Některé povrchy mohou vyžadovat nátěr v různých extracelulárních matric v závislosti na buněčném typu a studium . Všechny buněčné kultury vyžadují, které mají být provedeny , tak pro aseptické podmínky . Optimální prostředí

Většina buněčných typů mohou být kultivovány v Dulbecco modifikovaném Eagle médiu ( DMEM ), nebo Roswell Park Memoriál Institute ( RPMI ), s přídavkem 10 procent fetálního telecího séra , 2 milimoles o aminokyselina glutamin a antibiotika , například , 100 jednotek penicilinu a 0,1 miligramů na mililitr streptomycinu . Buňky jsou udržovány v jejich médiích ve vlhkém inkubátoru při teplotě 37 stupňů Celsia a 5 procent oxidu uhličitého .
Rozdělení

Buňky by měly být kontrolovány denně infekce , smrt nebo růstu . Poté, cokultura baňka tkáň je 80 procent vrstvou v buňkách , buňky by měla být rozdělena na udržení zdravíbuňky " a log fáze růstu . Media se odstraní a buňky se promyjí ve fyziologickém roztoku pufrovaném fosfátem . Adherentní buňky vyžadují přidání trypsinu a kyseliny ethylendiamintetraoctové ( EDTA) k odstranění buněčné adheze proteinů . Jemné míchání by měla odstranit buňky . Musí Media být přidán k neutralizaci trypsin /EDTA řešení .

Subkultury

naředěné buňky a tryspin /roztok EDTA může být centrifugovány na pelety a mytí buňky . Buňky mohou být znovu suspendovány v médiu a zředí a replated do nových lahví . Pokaždé, když buňky jsou rozdělenypočet buněk průchod se zvýší o jednu .
Media Změna

Média by měla být změněna dvakrát týdně odstraněním starých médií a nahradí se nový , zahřeje médií .