Jaký je lepší způsob, jak určit, kdy je roztok mléka v experimentu s trypsinem čirý?

Stanovení koncového bodu experimentu s hydrolýzou trypsinu kaseinu pozorováním, kdy se roztok vyčeří, může být subjektivní a nepřesné. Kvantitativnější a přesnější metodou je použití spektrofotometru k měření absorbance roztoku při specifické vlnové délce.

Zde je vylepšený postup pro určení koncového bodu experimentu s trypsinem pomocí spektrofotometru:

Materiály:

- Roztok trypsinu

- Roztok kaseinového substrátu

- roztok hydroxidu sodného (NaOH) (0,1 M)

- Spektrofotometr

- Kyvety

Postup:

1. Připravte reakční směs:

- V kyvetě smíchejte určitý objem roztoku kaseinového substrátu (např. 1 ml) s vhodným objemem roztoku trypsinu (např. 0,1 ml).

- Inkubujte směs při vhodné teplotě (např. 37 °C) po požadovanou dobu (např. několik minut).

2. Zastavte reakci:

- V určitých časových intervalech (např. každou minutu) odeberte malý objem reakční směsi (např. 0,1 ml) a přeneste ji do samostatné kyvety.

- Okamžitě přidejte dostatečné množství roztoku hydroxidu sodného (např. 1 ml), aby se reakce zastavila.

3. Změřte absorbanci:

- Pomocí spektrofotometru změřte absorbanci každé zastavené reakční směsi při specifické vlnové délce (např. 440 nm).

4. Vyneste do grafu absorbanci:

- Nakreslete graf s časem (osa x) a absorbancí (osa y).

5. Určete koncový bod:

- Analyzujte hodnoty absorbance v průběhu času. Koncový bod je časový bod, ve kterém absorbance dosáhne plató nebo vykazuje významný pokles, což ukazuje na rozsáhlou hydrolýzu kaseinu.

Tato metoda poskytuje objektivnější a kvantitativnější stanovení koncového bodu ve srovnání s vizuálním pozorováním vyčeření roztoku, protože se opírá o měření změny absorbance v důsledku uvolňování menších peptidů a aminokyselin během hydrolýzy kaseinu.