Jak měřit kataláza Koncentrace

katalázy jebiologické (organické ) katalyzátor . Tento enzym je jedním z nejsilnějších známých katalyzátorů a má blahodárné účinky na lidský organismus , a má zásadní význam pro život . Kataláza působí jako katalyzátor při urychlení odbourávání peroxidu vodíku . Peroxid vodíku jemetabolické vedlejší produkt , který je jedovatý pro buňky , ne-li odstranit . Katalázy pomáhá při odbourávání peroxidu vodíku na vodu a kyslík . Katalázy také pomáhá při oxidačních další toxiny , jako jsou fenoly , kyselina mravenčí , formaldehydem a alkoholy . Věci, které budete potřebovat
dvě 110 ml chromogenem ve fosfátovém pufru
300 l substrátu - 30 % peroxidu vodíku
400 μL.HRP - křenovou peroxidázou ve fosfátovém pufru
60 ml fosfátem vyrovnávací klipart 250 ml roztoku na ředění vzorků povrchově aktivní ve fosfátovém pufru
dva 30 ml Substrát ředidlo fosfátovém pufru
dva 30 ml zastavení činidla - azid sodný
Dvě lahvičky 160 IU /injekční lahvička standardní kataláza
Spektrofotometr
10 ul nastavitelné pipety
drahou 1 cm délky spektrofotometrické kyvety
1,5 ml polypropylenové mikrozkumavek s víčkem
zkumavky - 12x75 milimetrů ( 2,5 ml každá )
Timer
deionizovaná voda

Zobrazit další instrukce dovolená 1

Připravte si zásoby katalázy , který bude měření přidáním 200 mikrolitrů ( ul) deionizované vody, aby koncentrace katalázy v 50 ml ( ml ) lahvičky . Úroveň koncentrace catalese by měla být 160 jednotek na mililitr ( U /ml ) .
2

Přidat 30 ul zředěného katalasy do zkumavek . Přidá se 500 ul substrátu ( peroxid vodíku - H2O2 10 mm ) do každé zkumavky . Dávejte pozor, aby stříkající peroxidu vodíku při práci s ním .
3

Inkubujte každou jednotlivou zkumavku po dobu jedné minuty při pokojové teplotě .
4

Přidá se 500 a MU , L činidla do každé lahvičky . Uzavřete každou lahvičku a promíchejte převracením lahvičky nahoru a dolů . Nepoužívejte víří směs protřepejte lahvičku , nebo zamíchejte s objektem .
5

Přidá se 20 ul každé reakční směsi do zkumavek . Přidají se 2 ml HRP činidla do každé zkumavky . Opět promíchejte roztok otočením zkumavek několikrát .
6

Inkubujte řešení znovu , tentokrát po dobu 10 minut při pokojové teplotě .
7

Odečtěte absorbanci hladina roztoku spektrofotometrem . Spektrofotometru měří světlo vlnové délky přesně určit, jaké jsou současné a a co koncentrace látky . Tato metoda bude poskytovat přesné čtení koncentrací katalázy . Informace je užitečná v souvislosti s interakcí katalázy s peroxidem vodíku , jak je v tomto experimentu , a jak probíhá přirozeně v lidském těle .