Můžete použít sérum k provedení western blotu?
I když je možné použít sérum k provedení Western blotu, obecně se to nedoporučuje. Sérum je komplexní směs, která obsahuje buňky a proteiny, včetně těch, které mohou interferovat s detekcí specifických požadovaných proteinů. Kromě toho může mít sérum vysoký signál pozadí, což může ztížit detekci proteinů s nízkým výskytem. Z těchto důvodů se vzorky purifikovaných proteinů typicky používají ve Western blotech.
V určitých případech však může být nutné nebo výhodné použít sérum pro Western blotting. Pokud je například sledovaný protein ve vzorku purifikovaného proteinu přítomen v nízkém množství, použití séra může zvýšit šanci na detekci proteinu. Kromě toho lze sérum použít ke studiu interakcí protein-protein nebo k detekci protilátek proti specifickým proteinům.
Pokud je nutné použít sérum pro Western blotting, je důležité podniknout kroky k minimalizaci možnosti interference a signálu pozadí. Tyto kroky mohou zahrnovat:
* Příprava vzorku séra centrifugací k odstranění buněčného odpadu a nerozpustných částic.
* Ředění vzorku séra pro snížení koncentrace rušivých látek.
* Použití blokující látky, jako je hovězí sérový albumin (BSA), k minimalizaci nespecifických interakcí.
* Optimalizace podmínek Western blottingu, jako jsou koncentrace protilátek a inkubační doby, aby se snížil signál pozadí.
Celkově lze říci, že i když se použití séra pro Western blotting obecně nedoporučuje kvůli možné interferenci a signálu pozadí, může být v určitých případech nezbytné nebo výhodné. Při použití séra je nezbytná pečlivá optimalizace podmínek Western blottingu.
